Page 31 - pdf_publisher2

Попытки фотодинамического воздействия на бактерии предпринимались еще в начале текуще' го столетия (3). Однако ограниченные знания о механизмах действия и лимитированные возмож' ности синтеза фотосенсибилизаторов для леталь' ного воздействия на бактерии на многие десяти' летия охладили пыл первых исследователей. В на' стоящее время возродился интерес к изучению фотодинамического эффекта на патогенную мик' рофлору на значительно более высоком научно' техническом уровне. В немалой степени возрож' дению интереса к возможности летальной фото' сенсибилизации бактерий способствовали рас' пространение антибиотикорезистентных штам' мов патогенных микроорганизмов и проблемы госпитальной инфекции.

Фотодинамическая реакция возникает только при действии адекватных доз световой энергии на фотосенсибилизатор в присутствии в среде кисло' рода. При этом фотодинамическое повреждение носит локальный характер, и бактерицидный эф' фект лимитируется зоной светового воздействия, т.е. размером поля лазерного облучения сенсиби' лизированных тканей. Это позволяет избежать при фотодинамической терапии (ФДТ) гнойных ран нежелательного системного действия анти' биотиков.

Нами было проведено экспериментальное ис' следование влияния фотодинамического воздей' ствия на основных представителей микрофлоры гнойных ран.

Первая серия экспериментов проведена с це' лью изучения бактерицидного воздействия фото' сенсибилизатора. Изучение проводили in vitro ме' тодом «агаровых пластин» по отношению к Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus mirabilis. Штаммы вышеуказанных микробов бы'

ли выделены от больных из отделяемого ран; их идентификацию проводили стандартными мето' дами (1).

Для проведения основного эксперимента ис' пользовали чашки Петри с простым питательным агаром: 0,2 мл микробной взвеси каждого штамма в концентрации 5 х10 5 м.т. в 1 мл высевали газо' ном на чашки Петри. В качестве фотосенсибили' затора использовали отечественный препарат «Фотосенс», разработанный в ГНЦ «НИОПИК». Изучение антимикробной активности фотосенси' билизатора проводили двумя способами: луноч' ным и наложением салфеток площадью 1 см 2 на агар. Лунки на агаре делали с помощью пробойни' ка диаметром 0,5 см и заливали туда фотосенсиби' лизатор в концентрациях 500, 250 и 125 мкг/мл до заполнения лунки. На другие чашки накладывали салфетки, пропитанные фотосенсибилизатором в тех же концентрациях. Чашки помещали в термо' стат на сутки при 37 °С. На следующий день по зо' не задержки роста микроорганизмов определяли антимикробную активность препарата (2). Учитывая, что фотодинамическая терапия — двухкомпонентный метод, включающий в себя еще световое воздействие, была проведена 2 серия экспериментов — оценка бактерицидной актив' ности непосредственно после одного облучения. Использовали нелазерный источник света широ' кой полосы излучения (600—700 нм) и лазерное излучение от твердотельного лазера на алюминате иттрия с удвоенной частотой («Полюс'2»). Взвесь бактерий S.aureus, S. epidermidis, P. aeruginosa, E. coli, P. Мirabilis в концентрации 5х10 3 м.т в 1 мл в количестве 2 мл помещали в чашки Петри диа' метором 40 мм. (предварительно провели кон' трольный высев 0,2 мл исходной взвеси). Затем каждую чашку облучали 20 мин и проводили вы' сев 0,2 мл облученной взвесью, помешали в тер' мостат при 37 °С и на следующий день подсчиты' вали число выросших колоний.

В 3 серии экспериментов изучали синергиче'

Page 31 - pdf_publisher2_project

Page 31 - pdf_publisher2_project