Page 50 - pdf_publisher2_project

№ 2. 2011 г. Журнал «Паллиативная медицина и реабилитация»

50

рушение коллагена и желатина в ходе развития пародонтита вносят именно ММП клеток орга' низма хозяина [6].

В ряде работ исследовалась взаимосвязь отдель' ных полиморфизмов генов ММП и уровня самих ММП с тяжестью пародонтита, причем основная масса исследований была посвящена именно кол' лагеназам, в то время как информации о роли же' латиназ (ММП2 и ММП9) сравнительно мало. В ходе исследования жителей Бразилии было показано значительное повышение уровня экс' прессии ММП9 в пародонтальных карманах CD68(+) клетками [7]. Аналогичные наблюдения были сделаны для пациентов из Финляндии [8], Турции [9] и Чили [10]. Полученные данные ука' зывают на роль гормонов, цитокинов и состава микробиоценозов ротовой полости в повышении уровня ММП.

Исследование роли полиморфизма генов ММП2 и ММП9 в развитии пародонтита дает не' однозначные результаты. Так, в ходе исследова' ния взаимосвязи полиморфизма генов ММП2 и ММП9 и пародонтита у китайцев, достовреных ассоциаций между генотипом и тяжестью паро' донтита обнаружено не было [11]. В то же время в ходе исследования ассоциации отдельных вариан' тов ММП2, ММП9 и ММП12 с пародонтитом у пациентов из Турции выявлена ассоциация между вариантом T в позиции 1562 гена ММП9 и скоро' стью прогрессии пародонтита [12,13].

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ

Целью данной работы являлось исследование взаимосвязи некоторых вариантов генов ММП2 и ММП9 с развитием пародонтита у россиян.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследование проводилось на базе ФГУ ЦНИ' ИС и ЧЛХ Минздравсоцразвития РФ в отделении пародонтологии. Обследовано 155 пациентов, жи' телей Москвы и Московской области, в возрасте от 18 до 65 лет без тяжелой соматической патологии. Основным критерием для постановки диагноза хронический генерализованный пародонтит (ХГП) являлось отсутствие зубодесневого прикре' пления. Степень тяжести устанавливали на осно' вании глубины пародонтальных карманов и сте' пени деструкции костной ткани.

Так, для легкой степени ХГП глубина пародон' тальных карманов составляла до 3 мм, а рентгено' логическая картина подтверждала признаки на' чальной деструкции межзубных перегородок. При средней степени ХГП глубина пародон' тальных карманов варьировала от 3 до 6 мм, а при обследовании зачастую выявляли патологическую подвижность зубов 1'2 степени. Деструкция кор' тикальной пластинки и костной ткани межзубных перегородок при рентгенологическом исследова' нии составляла до 1/2 длины корня.

Тяжелая степень ХГП характеризовалась нали' чием пародонтальных карманов более 6 мм, пато' логической подвижностью зубов 2'3 степени, а при рентгенологическом исследовании выявляли деструкцию кортикальной пластинки и костной ткани более от 1/2 до 1/3 длины корня. Учитывал' ся характер жалоб и анамнез развития болезни. Основные жалобы были на периодическое гноете' чение, короткие сроки ремиссии после проводи' мого ранее лечения.

Экспериментальная группа включала 50 паци' ентов (20 мужчин и 30 женщин) в возрасте от 18 до 65 лет с диагнозом ХГП средней и тяжелой степени. Контрольную группу составили 105 чело' век (46 мужчин и 59 женщин) в возрасте от 18 до 55 лет, не предъявляющих никаких жалоб, без види' мых патологических изменений в тканях пародон' та.

Геномную ДНК пациентов экстрагировали из периферической крови при помощи набора реаген' тов «Проба'НК» (ООО «НПО ДНК'Технология», Россия) в соответствии с инструкцией к набору ре' агентов. Генотип по полиморфизмам ММП2'1306 C>T (rs243865), ММП2'735 A>C (rs2285052), ММП9'855 A>G (rs17576) и ММП9'1562 C>T (rs3918242) определяли при помощи ПЦР «в ре' альном времени» с использованием примыкаю' щих флуоресцентно'меченых проб (kissing probes) путем определения температуры плавления проб после амплификации (melting curve analysis). Пос' ледовательности использованных в работе прай' меров и флуоресцентно'меченых проб приведены в таблице 1.

ПЦР проводили с помощью детектирующего амплификатора «ДТпрайм» (ООО «НПО ДНК' Технология», Россия). Условия реакции: 94°С — 5 сек, 68°С — 10 сек в течение 40 циклов, плавле' ние с регистрацией уровня флуоресценции после амплификации. Учет результатов реакции прово' дили с помощью программного обеспечения дете' ктирующего амплификатора «ДТпрайм».

Статистическую обработку данных проводили с помощью свободно распространяемого программ' ного продукта WINPEPI версии 10.7 [14]. Для оп' ределения статистической значимости различий применялся критерии 2 Пирсона с поправкой на непрерывность Йейтса. Отношение шансов (OR) приведено с 95% доверительным интервалом (CI).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Распределение частот исследованных вариан' тов генов ММП2 и ММП9 приведено в табл. 2 и 3 соответственно.

Наблюдаемое распределение частот исследо' ванных вариантов генов соответствовало распре' делению Харди'Вайнберга.

Достоверные отличия исследованных групп по частоте встречаемости генотипов были обнаруже' ны лишь для полиморфизма ММП9'1562 C>T (rs3918242). Была выявлена ассоциация аллеля T полиморфизма MMP9'1562 с развитием хрониче'

pm#2_2011_23_june.qxd 23.06.2011 17:37 Page 50